LFB髓鞘染色簡介:
勞克堅牢藍(LFB)屬于銅-酞箐染料,在酒精溶液中具有與髓鞘磷脂結合的染色特性。應用LFB髓鞘染色可以很好地顯示出神 經組織的髓鞘結構。
LFB髓鞘染色實驗意義:
LFB染色觀察染色陽性纖維的深淺和多少,還可用來定量分析脫髓鞘病變及髓鞘再生等有關髓鞘改變情況。
實驗步驟:
(1)石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。
(2)染色:切片置于0.1% LFB染液60℃孵育過夜,自來水沖洗。
(3)分化:切片放入70%乙醇中(無固定時間);切片浸入0.05% 碳酸鋰中,鏡下控制分色時間至分色完全(可見灰質部分 顏色變淡);如分化不好這兩步交替進行幾次至鏡檢滿意,水洗。
(4)伊紅復染:0.1%伊紅復染1min,水洗。
(5)封片:電吹風吹干或烘箱吹干;二甲苯透明數分鐘,中性樹膠封片。
(6)顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。 實驗結果: 經髓鞘呈藍色;其他成分呈紅色。
實驗技巧:
(1)切片若為石蠟切片,要在二甲苯中先脫蠟,再至無水乙醇。
(2)0.05%碳酸鋰水溶液分色應該在顯微鏡下進行,至背景呈灰色為止。70%酒精再次分色時,至背景無色為止。
(3) LFB染色完后,可用焦油紫溶液或蘇木素-伊紅復染,這樣能更好地顯示出細胞的形態。
(4) 復染之后要入正丁醇漂洗脫水,這樣染色效果更佳。
(5) 溶液配制:勞克堅牢藍1g,95%酒精100ml,10%冰.醋.酸0.5ml?;靹蚝筮^濾,室溫保存。
LFB髓鞘染色樣片參考
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