免疫組化

應用免疫學基本原理，通過標記的特異性抗體（或抗原）對組織內抗原（或抗體）的分別進行組織和細胞原位檢測，從而進 行定位、定性及相對定量的研究。 

實驗意義 

1.免疫組織化學可應用于惡性腫瘤的病理診斷和科研工作。 

2.可與組織化學染色方法的形態學診斷相結合，提高疑難腫瘤的鑒別診斷的準確率，并為腫瘤進行進一步的病理分型。 

3.指導和提供臨床治療方案的選擇。 

實驗步驟 

1.石蠟切片免疫組化： 

①67℃烘箱烘片2小時，常規脫蠟至水，用pH 7.4的PBS沖洗三次，每次3 min； ②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩沖液中中檔微波處理10 min，蒸餾水沖洗三次，PBS沖洗三次，每次3 min； 

③3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗三次，每次3 min； 

④5~10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10 min，吸去血清后滴加稀釋至適當比例的一抗，37℃孵育1-2 h或者 4℃孵育過夜； 

⑤PBS沖洗三次，每次3 min；⑤滴加稀釋至適當比例的帶標記二抗，37℃孵育10~30 min，PBS沖洗三次，每次3 min； 

⑥滴加適當比例稀釋的辣根酶標記物工作液，37℃孵育10~30 min，PBS沖洗三次，每次3 min； 

⑦顯色劑顯色，自來水充分沖洗，復染細胞核，酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。 

2.冰凍切片免疫組化： 

①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內切片，厚度為5~6 μm； 

②載玻片可不打底，裱片后立刻用電吹風吹干； 

③染色前需用冷丙.酮4℃固定10~20 min； 

④PBS洗2次，每次5 min； 

⑤3%H2O2滅活內源性過氧化物酶20 min，需避光處理； 

⑥后續血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似，最后脫水透明封片進行觀察。

結果展示：

石蠟切片免疫組化

冰凍切片免疫組化

實驗完成周期及交付標準 

1.實驗周期：1-2周 

2.交付標準：蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器等） 

需確認的信息 

1.是做石蠟切片還是冰凍切片（推薦做石蠟切片） 

2.樣本的種屬和類型，是組織還是細胞？ 

3.樣本的數量 

4.是否提供一抗，我方可代購 

5.半定量分析要求 

6.拍照要求

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