TUNEL凋亡熒光實驗原理 

dUTP 缺口末端標記（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL ）法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發生凋亡時， DNA內切酶被激活，核小體間的基因組DNA被切斷，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）加上帶有熒光素FITC標記的dUTP，從而可以通過熒光顯微鏡進行檢測。 

TUNEL凋亡熒光實驗意義 

1.TUNEL法是一種分子生物學與形態學相結合的研究方法，可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色，可以準確 反映細胞凋亡最典型的生物化學和形態特征。 

2.可用于石蠟切片、冰凍切片、培養的細胞等進行細胞凋亡檢測，靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。 

3.操作簡便快捷，在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。 

TUNEL凋亡熒光實驗步驟： 

1.石蠟切片TUNEL顯色法： 

①石蠟切片常規脫蠟至水，脫蠟劑二甲苯，至水劑乙醇；

②PBS漂洗3×5 min； 

③加入蛋白酶K工作液37℃反應15-30 min, PBS漂洗3×5 min； 

④4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室溫固定15-30 min，PBS漂洗3×5 min； 

⑤浸入封閉液（3%H2O2）室溫封閉10 min，PBS漂洗3×5 min； 

⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶、熒光標記液、TUNEL檢測液； 

⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37℃避光孵育60 min，PBS漂洗3×5 min； 

⑧選擇是否用DAPI復染細胞核； 

⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察。 

2.冰凍切片TUNEL顯色法： 

①新鮮組織經處理后，立即在恒冷冰凍切片機內切片，厚度為5~6 μm； 

②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12 h；

③4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室溫固定10 min，PBS漂洗3×5 min； 

④浸入封閉液（3%H2O2）室溫封閉10 min，PBS漂洗3×5 min； 

⑤浸入通透液（0.1%Triton X-100溶于PBS中），室溫通透30 S-2 min；

⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶、熒光標記液、TUNEL檢測液

⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37°C避光孵育60min，PBS漂洗3x5 min;

⑧選擇是否用DAPI復染細胞核;

⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察。

實驗完成周期及交付標準 

1.實驗周期：1-2周 

2.交付標準：蠟塊、切片、染色圖片、實驗報告（實驗步驟、試劑、耗材等） 

需確認的信息 

1.樣本的種屬 

2.樣本的類型（固定的組織or蠟塊or切片） 

3.是否提供試劑盒 

4.拍照要求

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