免疫熒光 

免疫熒光技術又稱為熒光抗體技術，將熒光標記技術和免疫學方法結合起來，利用抗原抗體相互作用從而對組織或細胞內的 抗原或抗體物質進行定位、示蹤、定性以及相對定量等。 

實驗意義

1.免疫熒光技術特異性強、敏感性高、反應速度快、結果清晰明確，在臨床檢驗和科學研究工作上有很高的應用價值。 

2.操作簡便，便于推廣。 

實驗步驟 

1.石蠟切片免疫熒光： 

①烘箱內進行烘片，然后將切片進行常規脫蠟至水； 

②抗原修復：使用水浴鍋或電爐煮沸熱修復，或者中檔微波修復，緩沖液為0.01M檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）； 

③去除內源性酶：3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性后，PBS清洗3次×3 min； 

④封閉：5~10%正常血清封閉30 min； 

⑤一抗孵育：稀釋好的一抗4℃孵育過夜，PBS清洗3次×3 min； 

⑥二抗孵育：將稀釋好的帶熒光標記的二抗，搖床緩慢孵育1 h，PBS清洗3次×3 min； 

⑦DAPI復染核，PBS清洗3次×3 min； 

⑧封片：Mounting Medium封片，凝固后拍照。（多重熒光染色：可使用綠色熒光、紅色熒光和藍色熒光進行三重熒光染 色）。 

2.冰凍切片免疫熒光： 

①新鮮組織經處理后，立即在恒冷冰凍切片機內切片，厚度為5~6 μm； 

②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12 h； 

③4℃純丙.酮10 min處理，風干； 

④PBS漂洗3次×10 min； 

⑤0.3%Trion-100溶液37℃3次×10min； ④PBS漂洗3

次×5 min； 

⑥去除內源性酶；封閉，一抗孵育、二抗孵育、復核染、封片等與石蠟切片的處理類似，同樣也可做多重熒光染色。

結果展示

實驗完成周期及交付標準 

1.實驗周期：1-2周 

2.交付標準：蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告（實驗步驟、試劑、儀器等） 需確認的信息 1.是做石蠟切片還是冰凍切片（推薦做石蠟切片） 2. 樣本的種屬和類型，是組織還是細胞？ 

3.樣本的數量 

4.是否提供一抗，我方可代購 

5.半定量分析要求 

6. 拍照要求

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